Extracción de ARN por tejido
Cada tejido ofrece una ventana diferente al repertorio inmunitario de la llama. Adaptamos la fuente de la muestra a su proyecto.
De la célula inmunitaria al ARN que codifica el repertorio VHH.
El ARN que codifica los dominios VHH lo portan los linfocitos B y las células plasmáticas de la llama inmunizada. Estas células se distribuyen en varios compartimentos — sangre circulante, órganos linfoides secundarios, médula ósea — cuya accesibilidad y composición de subpoblaciones celulares difieren.
La elección del tejido depende de la fase de inmunización, la diversidad de repertorio buscada y el carácter más o menos invasivo de la toma de muestra. En la gran mayoría de los proyectos, la sangre periférica es suficiente; los tejidos linfoides profundos se reservan para necesidades específicas de diversidad o maduración de células plasmáticas.
Cuatro compartimentos inmunitarios, cuatro perfiles de repertorio.
Sangre periférica
PBL / PBMC — vía estándarLos linfocitos de sangre periférica (PBL) o las células mononucleares de sangre periférica (PBMC) se aíslan mediante centrifugación en gradiente de densidad tras cada extracción de sangre. Es la fuente menos invasiva: puede repetirse en varios puntos del calendario de inmunización para seguir la evolución del repertorio a lo largo de los refuerzos, sin procedimiento quirúrgico.
Ganglios linfáticos
Alta diversidad de células BLos ganglios linfáticos son el lugar de maduración de los linfocitos B activados. Tras los últimos refuerzos de inmunización, son especialmente ricos en células plasmáticas productoras de anticuerpos de alta afinidad, lo que permite enriquecer los bancos con clones ya madurados por hipermutación somática.
Bazo
Reservorio linfoideÓrgano linfoide secundario mayor, el bazo se moviliza cuando se requiere un acceso tisular más profundo para maximizar la representación del repertorio inmunitario, como complemento o alternativa a la sangre periférica.
Médula ósea
Células plasmáticas madurasLa médula ósea alberga células plasmáticas de larga vida. Es una fuente complementaria para proyectos que requieren un repertorio de anticuerpos maduros, estables en el tiempo y representativos de una memoria inmunitaria establecida.
¿Qué tejido para qué objetivo?
| Tejido | Carácter invasivo | Diversidad / perfil | Caso de uso |
|---|---|---|---|
| Sangre periférica (PBL/PBMC) | Mínimo — extracción de sangre | Estándar, seguimiento posible en el tiempo | Construcción rutinaria de banco inmune |
| Ganglios linfáticos | Moderado | Alta en células plasmáticas maduras | Enriquecimiento en clones de alta afinidad |
| Bazo | Invasivo | Muy alta, amplia representación | Proyectos que requieren máxima diversidad |
| Médula ósea | Moderado a invasivo | Células plasmáticas de larga vida | Repertorio de anticuerpos maduros y estables |
Extracción realizada inmediatamente después de la toma de muestra.
Aislamiento celular
Los PBL/PBMC se aíslan mediante centrifugación en gradiente de densidad (tipo Ficoll) directamente tras la extracción de sangre.
Extracción de ARN total
El ARN total se extrae mediante un método de referencia (tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo), realizado sin demora para limitar la degradación.
Transcripción inversa
El ARN mensajero se convierte en ADNc mediante cebado oligo(dT), punto de partida para la posterior amplificación del repertorio VHH.
Control de calidad
Cada extracto se cuantifica y se evalúa su integridad antes de su validación — vea nuestra página dedicada al control de calidad.